Chemical constituents from the agarwood of Aquilaria crassna
沉香为瑞香科( Thymelaeaceae) 沉香属( Aqui¯ laria)或拟沉香属(Gyrinops)植物含有树脂的干燥 芯材(中国药典委员会ꎬ2015) 沉香是传统的名 贵中药和香料ꎬ其味辛、苦ꎬ性微温ꎬ具有行气止 痛、温中止呕、纳气平喘等功效主要用于治疗胸 腹胀闷疼痛、胃寒呕吐呃逆、胃虚气逆喘急等( 中 国药典委员会ꎬ2015) 现代药理学研究发现沉 香具有镇痛、镇静、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、细胞毒、 抑菌、降糖、抗抑郁等药理作用( 戴好富ꎬ2017杨 洋等ꎬ2016ꎻ康科星等ꎬ2017) 目前报道的沉香属 植物约有 23 种主要分布于中国、泰国、印度、缅 甸、老挝、柬埔寨、马来西亚、印度尼西亚等东南亚 国家(戴好富和梅文莉ꎬ2015) 国内外学者对沉 香的化学成分研究始于 20 世纪 50 年代目前已鉴 定出了 300 多个化学成分ꎬ主要是倍半萜类和 2¯ (2¯苯乙基)色酮类化合物(Chen et al. 2012戴好 富2017 Naef 2015 邵 杭 等 2015, Shao et al. 2016向盼等2017Xiang et al. 2017)
柯拉斯那沉香树( A. crassna) 主要分布于柬埔 寨、泰国、老挝、越南等国家(戴好富和梅文莉 2015) 目前关于柯拉斯那沉香的化学成分和生 物活性研究报道较少本课题组前期对产自老挝 的柯拉斯那沉香进行了研究ꎬ报道了少量倍半萜 类和 2¯(2¯苯乙基) 色酮类化合物ꎬ部分化合物具 有一定的乙酰胆碱脂酶抑制活性和降血糖活性 (康科星等2017王红妮等2016杨洋等ꎬ2016 Yang et al. 2017)ꎮ 本研究选用柬埔寨野生柯拉 斯那沉香为材料从其乙醇提取物中分离鉴定了 10 个 2¯(2¯苯乙基)色酮类化合物(图 1)其中化
合物 6、7 和 9 均为首次从柯拉斯那沉香中分离得 到ꎮ 初步揭示了柬埔寨柯拉斯那沉香的化学成 分ꎬ为其进一步开发利用提供了科学依据ꎮ
1 材料与仪器
1.1 材料
沉香样品于 2017 年 11 月购于柬埔寨金边ꎬ经
中国热带农业科学院热带生物技术研究所王军博 士鉴定其基源植物为柯拉斯那( Aquilaria crassna) ꎬ 标本编号为( JPZ20171101) ꎬ保存于中国热带农业 科学院热带生物技术研究所ꎮ
1.2 仪器和试剂
仪器:柱层析硅胶 G(200 ~ 300 目ꎬ60 ~ 80 目)
(青岛海洋化工厂)旋转蒸发仪(德国 Heidolph Laborota) Sephadex LH¯20 ( 德 国 Merck 公 司) ODS(20~45 SymbolmA@ m)(日本 Fuji 公司), 高效液相色谱仪( Agilent 1260) ( 美国安捷伦科技 有限公司)ꎻ色谱柱(C18,250 mm×4.6 mmID)(日 本 Nacalai Tesque 公司)Rudolph Autopol III polar¯ imeter(美国 Rudolph Research Analytical)半制备 高效液相色谱仪(SUMMIT P680A)(美国 Dionex 公司)半制备色谱柱(C18250 mm×10.0 mmꎬID) ( 日本 COSMOSIL 公司) ELX¯800 酶标仪( 美国宝 特公司)Bruker AV¯500 型超导核磁共振波谱仪 TMS 为内标
试剂:乙酰胆碱酯酶、碘化硫代乙酰胆碱、二 硫代二硝基苯甲酸(DNTB)、他克林(美国 Sigma 公司) 人慢性髓原白血病细胞株 K562( 中国科学院上海生命科学研究院细胞库)
2 提取与分离
将干燥的柬埔寨柯拉斯那沉香样品(928.0 g) 用 95% 乙醇加热回流提取 3 次( 每次 3 h每次加 入乙醇 5 L)减压浓缩ꎬ得乙醇浸膏 375.2 g 用水 将乙醇提取物分散形成悬浊液ꎬ用石油醚进行萃 取ꎬ得到浸膏 440.0 mg剩余部分经减压柱色谱 以氯仿-甲醇(1∶0~0∶1)梯度洗脱得到20个 流份(Fr.1~Fr.20)
Fr.9 (6.9 g) 经 Sephadex LH¯20(石油醚 ∶ 氯 仿∶甲醇=2∶1∶1)洗脱得到3个流份(Fr.9- 1~Fr.9-3) Fr.9-3(5.0 g)经硅胶柱色谱以石 油醚-乙酸乙酯(50 ∶ 1)洗脱得到 9 个流份(Fr.9- 3-1~Fr.9-3-9) Fr.9-3-6(306.5 mg)经硅胶柱 色谱ꎬ以石油醚-氯仿-丙酮(100 ∶ 10 ∶ 1) 洗脱 得到14个流份(Fr.9-3-6-1~Fr.9-3-6-14) Fr.9-3-6-14(41.0 mg)通过半制备高效液相色谱
仪(C18柱35%乙腈水ꎬ流速 4 mLmin¯1检测波 长 244 nm)洗脱得到化合物 8(4.5 mg保留时间 12.8 min)
Fr.12 经 ODS 柱色谱ꎬ以甲醇-水(3 ∶ 7 ~ 1 ∶ 0)梯度洗脱得到 12 个流份(Fr.12-1 ~ Fr.12- 12)ꎮ Fr.12-7(1.5 g)析出部分白色固体ꎬ依次用 石油醚、氯仿、丙酮、甲醇清洗得白色固体 172.0 mg再经硅胶柱色谱ꎬ以氯仿-甲醇(200 ∶ 1 ~ 0 ∶ 1)梯度洗脱ꎬ得到 4 个流份(Fr.12-7-1~Fr.12- 7-4) Fr.12-7-4(42.0 mg)通过半制备高效液相 色谱仪(C18柱65%甲醇水流速 4 mLmin¯1检 测波长 222 nm)洗脱ꎬ得到化合物 6(5.9 mg保留 时间 11.0 min) Fr.12-7-2(29.4 mg)通过半制备 高效液相色谱仪(C18 柱32%乙腈水ꎬ流速 4 mL min¯1检测波长 242 nm)洗脱ꎬ得到化合物 5(4.0 mgꎬ保留时间 41.7 min)和化合物 4(4.4 mgꎬ保留 时间 47.2 min) Fr.12-10(1.9 g)经硅胶柱色谱 以氯仿-甲醇为洗脱剂梯度洗脱ꎬ得到 5 个流份 (Fr.12-10-1~Fr.12-10-5)ꎮ Fr.12-10-1(552.7
4 期 夏录录等: 柬埔寨柯拉斯那沉香的化学成分研究 543
mg)经 ODS以甲醇-水(3 ∶ 7~1 ∶ 0) 梯度洗脱 得到 7 个流份(Fr.12-10-1-1 ~ Fr.12-10-1-7) Fr.12-10-1-3(139.4 mg)通过半制备高效液相色 谱仪(C18柱ꎬ32%乙腈水ꎬ流速 4 mLmin¯1检测 波长 222 nm)洗脱得到 4 个流份(Fr.12-10-1-3 -1~Fr.12-10-1-3-4) Fr.12-10-1-3-3(19.0 mg)通过半制备高效液相色谱仪(C18 柱32%乙腈 水流速 4 mLmin¯1 检测波长 222 nm) 洗脱ꎬ得 到化合物 7(1.9 mgꎬ保留时间 21.2 min) Fr.12- 10-1-6(36.3 mg) 通过半制备高效液相色谱仪 (C18柱ꎬ45%乙腈水流速 4 mLmin¯1检测波长 244 nm)洗脱得到化合物 9(7.0 mg保留时间 12.8 min)
石油醚萃取物(440.0 mg)经 Sephadex LH-20 (甲醇)得到 3 个流份(Fr.21~Fr.23)ꎮ Fr.22(321.2 mg)经 ODS(甲醇-水3 ∶ 7~1 ∶ 0)梯度洗脱ꎬ得到 6 个流份(Fr.22-1~Fr.22-6) Fr.22-5(90.8 mg)经 硅胶柱色谱ꎬ以石油醚-丙酮(80 ∶ 1) 洗脱ꎬ得到 4 个流份(Fr.22-5-1~Fr.22-5-4) Fr.22-5-4(20.0 mg)经半制备高效液相色谱仪(C18 柱60%甲醇水 流速 4 mLmin¯1 检测波长 198 nm) 洗脱得到化 合物 1(1.5 mg保留时间 11.5 min)和化合物 2(1.7 mg保留时间 13.3 min) Fr.22-5-3(15.0 mg)通过 半制备高效液相色谱仪(C18 柱58%甲醇水流速 4 mLmin¯1检测波长 232 nm)洗脱得到化合物 3 (1.1 mg保留时间 21.6 min)
3 结构鉴定
化合物 1 黄色固体ESI¯MS m/z: 349.3 [M+Na]+分子式 C19 H18 O51 H NMR (CD3 OD 500 MHz): δH 2.99 (2H m H¯8′) 3.00 (2H m H¯7′) 6.15 (1H s H¯3) 6.64 (1H dd J=8.02.0HzꎬH¯6′)6.68(1HꎬdꎬJ=8.0 Hzꎬ H¯5′) 6.76 (1H d J = 2.0 Hz H¯2′) 7.37 (1H dd J = 9.2 3.1 Hz H¯7) 7.50 (1H dJ = 3.1HzH¯5)7.54(1HdJ = 9.2Hz H¯8) 3.74 (3H s 4′¯OMe) 3.89 (3H s 6¯ OMe) 13C NMR (CD3 OD 125 MHz): δC 171.7
(C¯2) 110.1 (C¯3) 180.4 (C¯4) 105.6 (C¯5) 158.6 (C¯6) 124.9 (C¯7) 120.7 (C¯8) 152.9 (C¯9) 124.9 (C¯10) 132.7 (C¯1′) 113.1 (C¯ 2′) 148.9 (C¯3′) 146.7 (C¯4′) 116.2 (C¯5′) 121.9 (C¯6′) 33.8 (C¯7′) 37.4 (C¯8′) 56.3 (6¯OMe) 56.3 (4′¯OMe) 经鉴定化合物 1 为 6¯ 甲氧基¯2¯ [2¯(3 羟基¯4¯甲氧基苯)乙基]色酮(李 薇2014)。
化合物 2 白色固体ESI¯MS m/z: 349.4 [M+Na]+分子式 C19 H18 O51 H NMR (DMSO¯d6 500 MHz): δH 2.83 (2H m H¯8′) 2.84 (2H m H¯7′) 6.10 (1H s H¯3) 6.72 (1H d J = 2.0 Hz H¯2′) 6.57 (1H d J = 8.0 Hz H¯5′) 6.53 (1H dd J = 8.0 2.0 Hz H¯6′) 7.29 (1H d J = 9.0 Hz H¯8) 7.30 (2H dd J = 9.0 3.0 Hz H¯7) 7.52 (1Hꎬ dꎬ J = 3.0 Hzꎬ H¯ 8)ꎬ 3.59 (3Hꎬ sꎬ 3′¯OMe)ꎬ 3.76 (3H s 6¯ OMe) 13C NMR (DMSO¯d6ꎬ 125 MHz): δC 168.9 (C¯2)ꎬ 109.0 (C¯3)ꎬ 176.6 (C¯4)ꎬ 104.8 (C¯5)ꎬ 156.4 (C¯6)ꎬ 123.1 (C¯7)ꎬ 119.8 (C¯8)ꎬ 150.7 (C¯9)ꎬ 123.8 (C¯10)ꎬ 130.8 (C¯1′)ꎬ 112.6 (C¯ 2′)ꎬ 144.9 (C¯3′)ꎬ 147.5 (C¯4′)ꎬ 115.4 (C¯5′)ꎬ 120.5 (C¯6′)ꎬ 31.9 (C¯7′)ꎬ 35.3 (C¯8′)ꎬ 55.8 (6¯OMe)ꎬ 55.5 (3′¯OMe)ꎮ 经鉴定化合物 2 为 6¯ 甲氧基¯2¯ [2¯(3¯甲氧基¯4¯羟基苯) 乙基] 色酮 (Konishi et al.ꎬ 2002).
化合物 3 黄色油状ꎬESI¯MS m/z: 333.3 [M+Na]+ꎬ分子 C19H18O4ꎮ1H NMR (CD3ODꎬ 500 MHz): δH 2.97 (2Hꎬ mꎬ H¯8′)ꎬ 3.05 (2Hꎬ mꎬ H¯ 7′)ꎬ 6.07 (1Hꎬ sꎬ H¯3)ꎬ 7.10 (1Hꎬ sꎬ H¯8)ꎬ 7.19 (1Hꎬ mꎬ H¯2′ ~ 6′)ꎬ 7.41 (1Hꎬ sꎬ H¯5)ꎬ 3.87 (3Hꎬ sꎬ 6¯OMe)ꎬ 3.94 (3Hꎬ sꎬ 7¯OMe)ꎻ 13C NMR (CD3ODꎬ 125 MHz): δC 170.7 (C¯2)ꎬ 110.0 (C¯3)ꎬ 179.9 (C¯4)ꎬ 104.8 (C¯5)ꎬ 149.4 (C¯6)ꎬ 156.7 (C¯7)ꎬ 101.1 (C¯8)ꎬ 154.5 (C¯9)ꎬ 127.5 (C¯10)ꎬ 141. 3 ( C¯1′)ꎬ 129. 6 ( C¯2′ꎬ C¯6′)ꎬ 129.4 ( C¯3′ꎬ C¯5′) ꎬ 127.5 ( C¯4′) ꎬ 34.1 ( C¯7′) ꎬ 37.0 (C¯8′)ꎬ 57.6 (6¯OMe)ꎬ 57.0 (7¯OMe)ꎮ 经 鉴定化合物 3 为 6ꎬ7 二甲氧基¯2¯(2¯苯乙基)色酮 (Alkhathlan & Al¯Hazimiꎬ2005)ꎮ
544 广 西
化合物 4 无色结晶ꎬESI¯MS m/z: 267.2 [M+H]+ꎬ分子式 C17 H14 O3ꎮ1 H NMR (DMSO¯d6ꎬ 500 MHz): δH 2.93 (4Hꎬ overlappedꎬ H¯7′ꎬ H¯ 8′)ꎬ 6.10 (1Hꎬ sꎬ H¯3)ꎬ 7.16 (2Hꎬ overlappedꎬ H¯7ꎬ H¯8) ꎬ 7. 24 ( 5Hꎬ overlappedꎬ H¯2′ ~ 6′) ꎬ 7.40 (1Hꎬ dꎬ J = 9.0 Hzꎬ H¯5)ꎻ 13C NMR (DMSO¯d6ꎬ 125 MHz): δC 168.3 (C¯2)ꎬ 108.6 (C¯3)ꎬ 176.7 (C¯4)ꎬ 119.4 (C¯5)ꎬ 150.0 (C¯6)ꎬ 126.2 (C¯7)ꎬ 119.4 (C¯8)ꎬ 149.5 (C¯9)ꎬ 124.0 (C¯10)ꎬ 140. 0 ( C¯1′)ꎬ 128. 3 ( C¯2′ꎬ C¯6′)ꎬ 128.4 ( C¯3′ꎬ C¯5′) ꎬ 126.2 ( C¯4′) ꎬ 32.1 ( C¯7′) ꎬ 34.8 (C¯8′)ꎮ 经鉴定化合物 4 为 6¯羟基¯2¯(2¯苯 乙基) 色酮( 梅文莉等ꎬ2010) ꎮ
化合物 5 白色粉末ꎬESI¯MS m/z: 297.3 [M+H]+ꎬ分子式 C18 H16 O4ꎮ1 H NMR (CD3 ODꎬ 500 MHz): δH 2.92 (2Hꎬ mꎬ H¯8′)ꎬ 2.98 (2Hꎬ mꎬ H¯7′)ꎬ 6.05 (1Hꎬ sꎬ H¯3)ꎬ 6.78 (2Hꎬ mꎬ H¯ 3′ꎬ H¯5′)ꎬ 7. 08 ( 2Hꎬ mꎬ H¯2′ꎬ H¯6′)ꎬ 7. 20 (1Hꎬ ddꎬ J = 9.0ꎬ 3.0 Hzꎬ H¯7)ꎬ 7.33 (1Hꎬ dꎬ J = 3.0HzꎬH¯5)ꎬ7.42(1HꎬdꎬJ = 9.0HzꎬH¯ 8)ꎬ 3.70 (3Hꎬ sꎬ 4′¯OMe)ꎻ 13C NMR (CD3 ODꎬ 125 MHz): δC 171.4 (C¯2)ꎬ 109.8 (C¯3)ꎬ 180.6 (C¯4)ꎬ 108.7 (C¯5)ꎬ 156.5 (C¯6)ꎬ 124.5 (C¯7)ꎬ 120.5(C¯8)ꎬ 152.0 (C¯9)ꎬ 123.1 (C¯10)ꎬ 133.2 (C¯1′)ꎬ 114. 9 ( C¯2′ꎬ C¯6′)ꎬ 130. 4 ( C¯3′ꎬ C¯ 5′)ꎬ 159.8(C¯4′)ꎬ 33.2 (C¯7′)ꎬ 37.3 (C¯8′)ꎬ 55.6 (4′¯OMe)ꎮ 经鉴定化合物 5 为 6¯羟基¯2¯ [2¯ (4¯甲氧基苯)乙基]色酮(杨峻山等ꎬ1989)ꎮ
化合物 6 黄色粉末ꎬESI¯MS m/z: 347.2 [M+H]+ꎬ分子式 C18H15ClO5ꎮ1H NMR (DMSO¯d6ꎬ 500 MHz): δH 2.89 (2Hꎬ mꎬ H¯8′)ꎬ 2.92 (2Hꎬ mꎬ H¯7′)ꎬ 6.16 (1Hꎬ sꎬ H¯3)ꎬ 6.59 (1Hꎬ ddꎬ J=8.2ꎬ2.1HzꎬH¯6′)ꎬ6.65(1HꎬdꎬJ=2.1 Hzꎬ H¯2′)ꎬ 6.78 (1Hꎬ dꎬ J = 8.2 Hzꎬ H¯5′)ꎬ 7.19 (1Hꎬ dꎬ J = 2.9 Hzꎬ H¯7)ꎬ 7.34 (1Hꎬ dꎬ J = 2.9 Hzꎬ H¯5)ꎬ 3.70 (3Hꎬ sꎬ 4′¯OMe)ꎻ 13C NMR (DMSO¯d6ꎬ 125 MHz): δC 168.4 (C¯2)ꎬ 108.9 (C¯3)ꎬ 176.2 (C¯4)ꎬ 107.2 (C¯5)ꎬ 146.3 (C¯6)ꎬ 122.6 (C¯7)ꎬ 122.2 (C¯8)ꎬ 146.1 (C¯9)ꎬ 125.1 ( C¯10)ꎬ 132. 4 ( C¯1′)ꎬ 115. 6 ( C¯2′)ꎬ
植 物 39卷 146.1 (C¯3′)ꎬ 146. 3 (C¯4′)ꎬ 112. 2 (C¯5′)ꎬ 118.7 (C¯6′)ꎬ 31.3 (C¯7′)ꎬ 35.0 (C¯8′)ꎬ 55.6 (4′¯OMe)ꎮ 经鉴定化合物 6 为 8¯氯¯6¯羟基¯2¯ [2¯ (3¯羟基¯4¯甲氧基苯)乙基]色酮(Liao et al.ꎬ 2016)
化合物 7 黄色粉末ꎬESI¯MS m/z: 331.4 [M+H]+ꎬ分子式 C18H15ClO4ꎮ1H NMR (DMSO¯d6ꎬ 500 MHz): δH 2.99 (2Hꎬ mꎬ H¯8′)ꎬ 3.04 (2Hꎬ mꎬ H¯7′)ꎬ 3.73 (3Hꎬ sꎬ 4′¯OMe)ꎬ 6.05 (1Hꎬ sꎬ H¯3)ꎬ 6.81 (2Hꎬ dꎬ J = 8.7 Hzꎬ H¯3′ꎬ H¯5′)ꎬ 7.12 (2Hꎬ dꎬ J = 8.7 Hzꎬ H¯2′ꎬ H¯6′)ꎬ 7.18 (1HꎬdꎬJ = 2.9HzꎬH¯7)ꎬ7.20(1HꎬdꎬJ = 2.9 Hzꎬ H¯5)ꎻ 13C NMR (DMSO¯d6ꎬ 125 MHz): δC 170.7 (C¯2)ꎬ 109.7 (C¯3)ꎬ 180.2 (C¯4)ꎬ 126.3 (C¯5)ꎬ 159.8 (C¯6)ꎬ 109.2 (C¯7)ꎬ 123.9 (C¯8)ꎬ 145.9 (C¯9)ꎬ 126.3 (C¯10)ꎬ 133.2 (C¯ 1′)ꎬ 130. 4 ( C¯2′ꎬ C¯6′)ꎬ 115. 0 ( C¯3′ꎬ C¯5′)ꎬ 159.8 (C¯4′)ꎬ 33.1 (C¯7′)ꎬ 37.2 (C¯8′)ꎬ 55.6 (4′¯OMe)ꎮ 经鉴定化合物 7 为 8¯氯¯6¯羟基¯2¯ [2¯ (4¯甲氧基苯)乙基]色酮(Gao et al.ꎬ 2012)
化合物 8 白色粉末ꎬESI¯MS m/z: 313.2 [M+H]+ꎬ分子式 C18H16O5ꎮ1H NMR (CDCl3ꎬ 500 MHz): δH 2.92 (2Hꎬ mꎬ H¯7′)ꎬ 2.82 (2Hꎬ mꎬ H¯ 8′)ꎬ 3.83 (2Hꎬ tꎬ J = 3.8 Hzꎬ H¯6ꎬ H¯8)ꎬ 3.97 (1HꎬtꎬJ = 3.1HzꎬH¯7)ꎬ4.34(1HꎬdꎬJ = 3.5 Hzꎬ H¯5)ꎬ 6.15 (1Hꎬ sꎬ H¯3)ꎬ 6.84 (2Hꎬ dꎬ J = 8.6 Hzꎬ H¯3′ꎬ H¯5′)ꎬ 7.08 (2Hꎬ dꎬ J = 8.6 Hzꎬ H¯2′ꎬ H¯6′)ꎬ 3.79 (3Hꎬ sꎬ 4′¯OMe)ꎻ 13C NMR (CDCl3ꎬ 125 MHz): δC 168.4 (C¯2)ꎬ 114.3 (C¯ 3)ꎬ 177.7 (C¯4)ꎬ 47.0 (C¯5)ꎬ 46.6 (C¯6)ꎬ 48.8 (C¯7)ꎬ 47.9 (C¯8)ꎬ 161.3 (C¯9)ꎬ 120.9 (C¯10)ꎬ 131.3 (C¯1′)ꎬ 129.3 (C¯2′ꎬ C¯6′)ꎬ 114.2 (C¯3′ꎬ C¯5′)ꎬ 158.5 (C¯4′)ꎬ 32.2 (C¯7′)ꎬ 35.7 (C¯8′)ꎬ 55.4 (4′¯OMe)ꎮ 经鉴定化合物 8 为 Oxidoagaro¯ chromone B(杨洋等ꎬ2016)
化合物 9 (9a 和 9b) 白色固体ꎬESI¯MS m/ z: 609.2 [M+H]+ꎬ分子式 C36 H32 O9ꎮ1 H NMR (CD3 ODꎬ 500 MHz): δH 2.87 (2Hꎬ mꎬ H¯8′)ꎬ 2.92 (2Hꎬ mꎬ H¯8′′′)ꎬ 2.97 (2Hꎬ mꎬ H¯7′)ꎬ 3.08 (2Hꎬ mꎬ H¯7′′′)ꎬ 4. 32 ( 1Hꎬ ddꎬ H¯6)ꎬ 4. 46
4 期 夏录录等: 柬埔寨柯拉斯那沉香的化学成分研究 545
(1Hꎬ dꎬ H¯8)ꎬ 4.49 (1Hꎬ ddꎬ H¯5)ꎬ 4.73 (1Hꎬ dꎬ H¯7)ꎬ 6.06 (1Hꎬ sꎬ H¯3)ꎬ 6.17 (1Hꎬ sꎬ H¯ 3′′)ꎬ 6.69 (1Hꎬ dꎬ J = 8.3 Hzꎬ H¯6′′′)ꎬ 6.75 (1Hꎬ dꎬ J = 8.3 Hzꎬ H¯5′′′)ꎬ7.18 (5Hꎬ mꎬ H¯ 2′ ~ H¯6′)ꎬ 7.36 (1Hꎬ ddꎬ J = 9.2ꎬ 3.1 Hzꎬ H¯ 7′′)ꎬ 7.50 (1Hꎬ dꎬ J = 3.1 Hzꎬ H¯5′′)ꎬ 7.54 (1Hꎬ dꎬ J = 9.2 Hzꎬ H¯8′′)ꎬ 3.76 (3Hꎬ sꎬ 4′′′¯OMe)ꎬ 3.89 (3Hꎬ sꎬ 6′′¯OMe)ꎻ 13C NMR (CD3 ODꎬ 125 MHz): δC 170.5 (C¯2)ꎬ 113.7 (C¯3)ꎬ 180.9 (C¯ 4)ꎬ 33.4 (C¯5)ꎬ 65.5 (C¯6)ꎬ 75.8 (C¯7)ꎬ 70.3 (C¯8)ꎬ 164.3 (C¯9)ꎬ 122.8 (C¯10)ꎬ 141.2 (C¯ 1′)ꎬ 129. 4 ( C¯2′ꎬ C¯6′)ꎬ 129. 5 ( C¯3′ꎬ C¯5′)ꎬ 127.4 (C¯4′)ꎬ 33.9 (C¯7′)ꎬ 36.2 (C¯8′)ꎬ 171.8 (C¯2′′)ꎬ 110.0 (C¯3′′)ꎬ 180.4 (C¯4′′)ꎬ 105.6 (C¯ 5′′) ꎬ 158.5 ( C¯6′′) ꎬ 124.9 ( C¯7′′) ꎬ 120.9 ( C¯8′′) ꎬ 152.9 (C¯9′′)ꎬ 124.9 (C¯10′′)ꎬ 131.8 (C¯1′′′)ꎬ 123.9 ( C¯2′′′)ꎬ 142. 8 ( C¯3′′′)ꎬ 148. 0 ( C¯4′′′)ꎬ 112.4 (C¯5′′′)ꎬ 122.6 (C¯6′′′)ꎬ 29.9 (C¯7′′′)ꎬ 37.5 (C¯8′′′)ꎬ 56.3 (6′′¯OMe)ꎬ 56.5 (4′′′¯OMe)ꎮ 经鉴 定化合物 9 平面结构为 4′¯demethoxyaqusisnenone D(Huo et al.ꎬ 2018)
据文献中报道ꎬ平面结构为 4′¯demethoxyaqusis¯ nenone D 的化合物被以一对对映异构体分离得到ꎬ 经 NMR 检测发现本研究所得的化合物具有相同的 核磁谱图ꎬ但经旋光测试发现其具有较文献数据较 小的旋光值ꎬ即[α]25 D = 0.07 (c 0.56ꎬ MeOH)ꎬ 由此判断其可能是一对对映异构体ꎬ经手性色谱柱 分析ꎬ结果显示其为两个化合物的混合物ꎬ即化合 物 9a 和 9b(图 2)
4 活性测试
化合物 1、2、4 和 5 参照 Ellman 法(Ellman et al.ꎬ 1961ꎻYang et al.ꎬ 2014)进行了乙酰胆碱酯酶抑 制活性的测试ꎮ 本研究结果表明ꎬ化合物 1 和 2 具 有一定的乙酰胆碱酯酶抑制活性(表 1)ꎮ 经 t 检 验ꎬ他们与对照的差异达显著水平(P<0.05)ꎮ 化合 物 1、2、4 和 5 参照 MTT 法( Mosmannꎬ1983) 进行细 胞毒活性测定ꎮ 研究结果表明化合物 2 对人慢性髓 原白血病细胞 K562 具有较弱的抑制作用ꎬ化合物1、4和5无活性ꎮ 化合物2的IC50为43.65 μg mL¯1ꎬ阳性对照紫杉醇的 IC50 为 1.9 μgmL¯1ꎮ 经 t 检验ꎬ化合物 2 在反应终浓度为 100、50、25、12.5 μg mL¯1时与对照的差异达显著水平(P<0.05)(表 2)
5 讨论
迄今为止ꎬ关于柬埔寨所产沉香化学成分研 究的文献报道仅有一篇ꎬ且只得到了几个简单的 2¯(2¯苯乙基)色酮和倍半萜类化合物(Alkhathlan & Al¯Hazimiꎬ2005)ꎮ 本研究采用多种色谱技术ꎬ 从柬埔寨柯拉斯那沉香乙醇提取物中分离得到 10 个2¯(2¯苯乙基)色酮类化合物ꎬ其中ꎬ化合物6,7 和 9 为首次从柯拉斯那沉香中分离得到ꎬ丰富了 柬埔寨所产沉香的化学成分ꎮ 目前ꎬ从沉香中分 离鉴定出的含氯取代的 2¯(2¯苯乙基) 色酮和 2¯ (2¯苯乙基)色酮二聚体数量较少(Yagura et al.ꎬ 2003ꎻLiao et al.ꎬ 2016ꎻGao et al.ꎬ 2012ꎻWu et al.ꎬ 2012ꎻ戴好富ꎬ2017ꎻHuo et al.ꎬ 2018ꎻXiang et al.ꎬ 2017ꎻYang et al.ꎬ 2017)ꎮ 本研究得到了两个含氯 取代的 2¯(2¯苯乙基)色酮和两个 2¯(2¯苯乙基)色 酮二聚体:8¯氯¯6¯羟基¯2¯ [2¯(3¯羟基¯4¯甲氧基 苯)乙基]色酮(6)、8¯氯¯6¯羟基¯2¯ [2¯(4¯甲氧基 苯) 乙基] 色酮(7) 和 4′¯demethoxyaqusisnenone D (9)ꎬ为研究不同产地沉香的化学成分差异提供了 一定依据ꎮ 本研究活性测试结果显示ꎬ化合物 1 和 2 对乙酰胆碱脂酶具有一定的抑制活性ꎬ化合 物 2 对人慢性髓原白血病细胞具有较弱的抑制活 性ꎬ为柬埔寨柯拉斯那沉香的进一步研究和开发 利用提供了一定的理论依据
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